Fluorofóros | Fluorofóros

PALABRAS CLAVE: Fluorescencia, epí-fluorescencia, confocal, blanqueamiento por luz, toxicidad por luz, FRET, FRAP, FLIP, TIRF, FLIM.

DEFINICIÓN:

Una molécula o parte de una molécula que emite fluorescencia después de ser excitada con luz.

TECNOLOGÍA:

Cuando un fotón excita a un fluoróforo, sus niveles de energía electrónica y vibracional son elevados. Cuando el fluoróforo se relaja a su estado cero, el fluoróforo libera energía en forma de un fotón. La energía se pierde durante el proceso, así el fotón emitido por el fluoróforo es de menor energía (por ejemplo, mayor longitud de onda) que es absorbida (conocido como cambio Stokes o ley de Stokes). La intensidad y longitud de onda de la luz emitida dependerá tanto del fluoróforo como de su ambiente químico.

Existen varios fluoróforos comercialmente disponibles para obtener imágenes microscópicas (por ejemplo, GFPS, puntos cuánticos, tintes fluorescentes) y los cuales difieren en sus características de excitación y emisión. Los fluoróforos se pueden describir también en términos de eficiencia del proceso fluorescente por ejemplo su rendimiento cuántico (el cociente del número de fotones emitidos entre el número de fotones absorbidos) y su tiempo de vida fluorescente (el tiempo que la molécula se mantiene en su estado de excitación antes de emitir un fotón). Los fluoróforos pueden ser dirigidos hacia estructuras específicas para la obtención de imágenes por transfección (por ejemplo, en el caso de GFPS en células vivas), por inmuno-objetivos, o por interacción de grupos químicos específicos con grupos objetivos en el espécimen (por ejemplo, el DAPI se une al DNA, y el grupo de isotiacioanto en fluoresceina isoticionato se une a los amino grupos en las proteínas).

APLICACIONES:

Los fluoróforos y su fluorescencia resultante brindan una forma extremadamente poderosa para brindar contraste en imágenes microscópicas, especialmente en ambientes biológicos. Se pueden obtener imágenes simultáneamente diferentes estructuras celulares y moléculas usando fluoróforos múltiples mientras sus emisiones o tiempos de vida fluorescente se puedan distinguir claramente. Los fluoróforos habilitan el rastreo de moléculas sencillas usando TIRF, y la energía de transferencia entre fluoróforos se pueden explotar en la identificación de moléculas interactuando cercanamente (FRET). El blanqueamiento de fluoróforos es una técnica explotada en técnicas como FLIP y FRAP para monitorear el tráfico molecular en células vivas. Los fluoróforos también son importantes en identificación de minerales, contaminantes e impurezas en la ciencia de materiales, geología, inspección de semiconductores, y aplicaciones de ciencias ambientales.

CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:

Los fluoróforos fluorescentes se pueden observar en casi cualquier microscopio Nikon vertical, invertido, de polarización o estereomicroscopio con la iluminación apropiada (episcópica o diascópica) y filtros. Las exclusiones incluyen al Coolscope y los microscopios estereoscópicos SMZ6. La imagen fluorescente se puede llevar a cabo en el sistema de imagen e incubación BioStation. Varios objetivos especializados están disponibles (Plan Fluor, Súper Fluor, Plan Apocromático, Plan Apocromático VC).

SISTEMA RECOMENDADO:

Para la mejor transmisión posible fluorescente desde los fluoróforos los microscopios invertidos Nikon Ti y las series de microscopios biológicos verticales incorporan la tecnología de eliminación de ruido para mejorar los cocientes de señal entre ruido.

LIGAS:

Introducción a la fluorescencia: [microscopyu]