Fluorescencia, GFP

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Con MetaMorph, usted puede hacer sofisticados protocolos de tiempo fácilmente para sus experimentos fluorescentes. La interfase dedicada del usuario para los experimentos de pruebas fluorescentes graba las condiciones de operación, lo que facilita correr estudios similares.

 

MetaMorph puede adquirir imágenes sencillas o varias imágenes durante experimentos de lapso  de tiempo. Usted puede adquirir uno o dos colores fluorescentes y una imagen de luz transmitida (contraste de fases, DIC, luz polarizada) y sobreponer la imagen fluorescente con las de luz transmitida en una imagen de color.

 

La proteína verde fluorescente (GFP), de la Aequorea victoria, (la misma medusa que provee el indicador de calcio aequorina), ha estimulado una gran cantidad de excitación entre los biólogos moleculares y aquellos que estudian células desde la publicación de Chalfie et al. (1994)

 

El GFP fue usado para seguir los sitios donde hay contacto de célula a célula. Cortesía del Dr. M. Davis C. Wulefing, y M Sjaastad. Universidad de Stanford.

Esto es debido a que el GFP es una pequeña proteína (27 Kd) y las secuencias de DNA codificadas para el GFP se pueden manipular re-combinando la tecnología DNA para crear fusiones de genes entre el GFP y cualquier proteína de interés.

 

Tales construcciones de DNA se pueden introducir en células vivas para expresar la marcación  del GFP fluorescente en la proteína de interés para el investigador. (note que en la vida real, algunas fusiones de genes pueden evitar que el GFP emita fluorescencia y/o pueda no ser funcional para la proteína de interés). El mayor uso de la marcación es para localizar proteínas de interés a un tipo específico de células y/o localización sub-celular en células vivas y organismos.

 

Un buen ejemplo del tipo de fusión de proteínas que se pueden hacer es la publicación de Olson et al. (1995) en GFP-MAP4.

El rango de posibilidades se revisa en Chalfie (1995) Stearns (1995) y Kain et al (1995)

 

Moriyoshi et al. (1996) ha demostrado la fusión de GFP-genes transferidos en neuronas post-mitosis usando adenovirus recombinados mediados por transferencia de genes por una infección viral. Esto abre las posibilidades de marcar células u organelos, tales como el crecimiento de conos nerviosos, con GFP.

 

El GFP también se usa como reporte de expresión de genes. En este caso la secuencia del código GFP DNA se coloca atrás de un promotor (y/o una secuencia DNA regulatoria) de interés, y se introduce en las células. Esto ha excitado a varios biólogos moleculares ya que esto significa que ellos pueden realizar estudios de promotores detallados en organismos vivos.  Conozca másÞ


        

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