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TIRF Láser, Características Clave

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  Características Clave

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Iluminación Láser Segura y Sencilla
Contraste de Interferencia de Reflexión de Superficie
Iluminación de Onda Evanescente
Objetivos CFI Plan Apocromático TIRF
Integración en el Sistema de Epí-fluorescencia

Cociente Ultra Alto Señal/Ruido

Configuración Confocal TIRF-C1
Observación de Imágenes Multimodo
Extendible

 

 La iluminación Láser es Segura Fácil de Usar

Para cumplir con los estándares de seguridad láser, el obturador láser tiene un mecanismo de seguro interconectado. El obturador láser no operará cuando el camino óptico este dirigido a los oculares, previniendo que la iluminación láser entre en los ojos del usuario a través de los oculares.

 El Método de (SRIC) Contraste de Interferencia de Reflexión de Superficie Puede Revelar Contracturas Focales Antes de Cambiar a TIRF

TIRF, SRIC y sobreposicionamientoYa que la onda de iluminación evanescente excita aproximadamente 100nm desde la superficie del vidrio, la observación TIRF requiere que el espécimen este en contacto con el cubre-objetos, de otra forma no se obtiene una imagen TRIF. El SRIC hace que todas las superficies en contacto con el vidrio aparezcan negras, permitiendo a los usuarios confirmar si el espécimen se adhirió al vidrio antes de proceder a la observación TIRF. Como no se usa luz de excitación en este proceso, se reduce el daño al espécimen y los usuarios pueden tomar su tiempo para enfocar.

Nikon ha desarrollado un sistema SRIC que se puede usar tanto con el láser TIRF-2 como con el sistema TIRF de luz blanca. Usar el SRIC es tan fácil como cambiar a un cubo de filtros especial

Imágenes cortesía del Dr. Masaya Hashido, Universidad de Tokio.

 Iluminación de Onda Evanescente

Como Funciona el TIRFLos objetivos TIRF de alta A N hacen posible introducir iluminación láser en ángulos incidentes mayores al ángulo crítico (qc) dando como resultado TRIF que crea una onda evanescente inmediatamente adyacente a la interfase cubre objetos – espécimen. La onda evanescente llega a su máximo a unos cientos de nanómetros dentro del espécimen y su energía cae exponencialmente.

Diagrama TIRFEl sistema láser TIRF de Nikon utiliza esta onda evanescente para excitar moléculas sencillas en la delgada sección en contacto con el cubre objetos. Ya que el espécimen no se excita más allá de la onda evanescente, este sistema de imagen puede producir imágenes fluorescentes con un cociente muy alto señal entre ruido (S/R).

 Objetivos CFI Plan Apocromáticos.
Anillo de correccion de temperatura CFI60 NikonEstos son los primeros objetivos del mundo de inmersión en aceite que incorporan un anillo de corrección para cambios de temperatura y espesor de cubre objetos. Girando su anillo de corrección los investigadores pueden eliminar fácilmente las aberraciones esféricas, una influencia negativa en la calidad de la imagen resultante de los cambios inducidos por la  temperatura en el índice deObjetivos de Correccion de Temp CFI60 refracción del aceite de inmersión y la influencia de la variación del espesor del cubre objetos. Los lentes han sido calibrados desde un rango de 23°C (temperatura ambiente) a 37°C (temperatura fisiológica). Adicionalmente, estos objetivos también brindan espectaculares imágenes DIC, epí-fluorescencia, Confocal y para deconvolución de imágenes, mientras que brindan un fuerza poderosa de trampa durante aplicaciones de pinzas láser.
 Integración al Sistema de Epí-fluorescencia
El nuevo desarrollo del sistema láser TIRF-2 combina el sistema láser TIRF y el sistema de epí-fluorescencia en una sola unidad. Los investigadores pueden observar el mismo campo de observación usando los métodos TIRF  y Epí-fluorescencia con solo seleccionar las fuentes de iluminación a través de un obturador. La alineación es extremadamente fácil.
 Cociente Señal/Ruido Extremadamente Alto que Permite la Observación de Moléculas Sencillas.
Membrana BasalEl cociente extremadamente alto señal/ruido creado por el sistema de imagen TIRF de Nikon hace posible la observación de moléculas sencillas. Gracias al mecanismo propietario de Nikon eliminador de ruido, el sistema también puede producir imágenes fluorescentes que le quitarán el aliento con un alto coeficiente S/R.

Espécimen: receptores neurotransmisores marcados con YFP expresados en neuronas del hipocampo dispersas en cultivo primario

Imágenes cortesía del Dr. Chieko Nakada, Universidad de Kioto, Profesor Campo oscuro-Investigador Shigeo Okabe, Universidad Médica y Dental de Tokio.

 Configuración TRIF-C1
Sistema Multimodo TIRFEl sistema TIRF-C1 permite imagen multimodo con TIRF láser, Confocal y Epí-fluorescencia. Esta configuración puede ser una poderosa herramienta de investigación, permitiendo la investigación de un evento en la membrana celular, y la habilidad de seguir los eventos subsecuentes en cascada dentro de la célula.
 Observación de Imágenes Multi-Modo

La integración del TIRF con el escaneo láser Confocal es una poderosa combinación de modalidades que permiten  el estudio de eventos dinámicos  en la membrana celular además de la imagen 3D con un cociente extremadamente alto señal entre ruido a grandes profundidades dentro de las células o tejidos.

 Extendible

La estructura modular extendible del microscopio invertido Ti facilita la integración del TIRF láser con la epí-fluorescencia estándar o el W-TIRF (TIRF de luz blanca) de alto desempeño y con el iluminador oblicuo, dejando espacio para la integración del “Sistema de Enfoque Perfecto” o un modo de imagen adicional.

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