Objetivos de inmersión en agua | Objetivos de inmersión en agua

PALABRAS CLAVE: imagen de células vivas, imagen de células profundas, inmersión en aceite, aberraciones esféricas, A. N., resolución,  objetivos para trabajo en contacto con agua, Kaede, GFP

DEFINICIÓN:

Objetivos diseñados para usarse con agua como medio de inmersión sobre especimenes con cubre objetos.

TECNOLOGÍA:

Todas las técnicas de inmersión están diseñadas para obtener la máxima A. N. del lente e incrementar la resolución. Con la imagen de células vivas, las células usualmente están inmersas en un medio de cultivo dentro de una caja de cultivo. Las regiones de interés puede estar 50 – 200 micras lejos del cubre objetos. Los objetivos de gran A. N. de inmersión en aceite no son ideales para imágenes de planos focales que no están inmediatos al cubre objetos debido a las aberraciones (particularmente las aberraciones esféricas causadas por diferencias en los índices de refracción en el camino óptico) se incrementan con la profundidad de imagen. Cuando las células deben ser observadas en tejidos profundos, los lentes de inmersión en agua muestran un desempeño superior en términos de resolución y corrección de aberración comparada contra los lentes de inmersión en aceite. Cuando los lentes de inmersión en agua se usan, el camino óptico es simétrico: la luz pasa desde las células (acuoso) al vidrio (cubre objetos) al agua (medio de inmersión) y después nuevamente al vidrio (lente del objetivo). Los objetivos de inmersión en agua tienen una A. N. menor que los lentes comparables de inmersión en aceite pero habilitan imágenes de alta resolución a través de capas acuosas de aproximadamente 200 micras de espesor. Otra ventaja de los lentes de inmersión en agua es que, a diferencia del los objetivos de inmersión en aceite, estos no requieren de limpieza especial, no hay riesgo de contaminación con medio fisiológico, y el agua no tiene la fluorescencia inherente que puede complicar la interpretación de la imagen.

APLICACIONES:

Los objetivos de inmersión en agua son ideales para la investigación de las dinámicas celulares dentro de los tejidos vivos donde pueden ocurrir eventos importantes en lo profundo del espécimen y lejos del cubre objetos.

CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:

El objetivo de inmersión en agua de Nikon, el CFI Plan Apocromático corregido para violeta (VC) 60x WI (A. N. 1.20; D. T. 0.27) corrige la aberración cromática axial para cinco líneas que van desde 405 – 656nm. Este lente también esta libre de viñeta: la resolución del objetivo es uniforme a través de todo el campo de observación haciéndolo la elección ideal para microfotografía digital. En imagen fluorescente, algunas pruebas requieren de la óptica Plan Apocromático VC  para la activación y obtención de imagen. Estas incluyen CFP, GFP, YFP, Cherry-FP, Tomato-FP, PA-GFP, Kaede y PS-CFP. Los lentes Plan Apocromático VC no solamente trabajan bien in la parte violeta del espectro, sino que también trabajan bien en el IR habilitando mayor penetración en el espécimen. Este objetivo, es capaz de acomodar una longitud de onda de excitación de 405nm y obtención de imagen desde el azul a partes rojas del espectro, también es útil para técnicas de puntos cuánticos profundos en células.

Nikon también provee objetivos multi-inmersión apropiados para inmersión en aceite, glicerina o agua (CFI Plan Fluor 20x A. N. 0.75 D. T. para aceite: 0.35; glicerina: 0.34; agua: 0.33mm) prisma DIC: 20x, 20x-C

SISTEMA RECOMENDADO:

Para la máxima flexibilidad en aplicaciones de fluorescencia de células vivas, las series invertidas de Nikon Ti, TE2000 con los sistemas confocales C1plus, C1si, o LiveScan Sweptfield y el objetivo CFI Plan Apocromático VC 60x WI (A. N. 1.20; D. T. 0.27).

LIGAS:

Objetivos de inmersión en agua [microscopyu]