mFISH | fluorescencia multicolor hibridización in situ
PALABRAS CLAVE: fluorescencia, fluoróforo, FISH, CGH.
DEFINICIÓN:
El mFISH usa varios tintes fluorescentes para caracterizar simultáneamente cromosomas en un paso de hibridización.
TECNOLOGÍA:
mFISH usa varias pruebas fluorescentes para obtener una firma a color distintiva para cada cromosoma. Etiquetado de “Combinación”, que envuelve el etiquetado de cada cromosoma con una combinación de un número limitado de tintes, es usado para sobrepasar las limitantes de resolver limpiamente varios fluoróforos. La separación de los espectros de emisión y excitación es a través del uso de los filtros apropiados. El mFISH requiere detección de pruebas altamente sensibles.
Los colores creados en mfish pueden no ser distinguibles por el ojo humano. Los pseudo-colores permiten identificar más fácilmente los colores asignados a cada prueba. Los re-arreglos cromosómicos se pueden observar como cambios de color dentro de los cromosomas afectados. La técnica permite la rápida identificación de alteraciones simples y complejas de cromosomas en las dispersiones de metafase. La medición del tiempo de vida de fluorescencia, y el uso de las pruebas de larga vida, brinda más posibilidades en brindar contraste en estudios de mFISH.
APLICACIONES:
Aplicable a investigación biomédica y estudios citogenéticos, el mFISH es usado para identificar re-arreglos estructurales de cromosomas no-al-azar, que no son detectables por otros métodos. Estos re-arreglos pueden ser asociados con una enfermedad (especialmente cáncer) iniciación y progresión.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
El mFISH requiere un microscopio de grado de investigación (biológico vertical) con fluorescencia y una torreta de filtros motorizada. El programa de análisis de imágenes se requiere para la asignación de pseudo-color y su interpretación. Los objetivos de alta transmisión, libres de aberraciones de color y esféricas, son esenciales para obtener imágenes de áreas pequeñas de los cromosomas.
SISTEMA RECOMENDADO:
El Eclipse 90i es ideal para la captura de datos de fluorescencia de bajo nivel de luz y habilita la captura de imagen automatizada. Hay disponibles varios paquetes de análisis de datos citogenéticos para facilitar la interpretación de la imagen.
LIGAS:
