Lapso de tiempo | Imagen de lapso de tiempo

PALABRAS CLAVE: BioStation, imagen digital, cultivo celular, celogía, cámara CCD, control ambiental, TIRF, FRET, FRAP, FLIP, foco

DEFINICION:

La imagen de lapso de tiempo envuelve la captura de imágenes de eventos dinámicos a intervalos de tiempo predeterminados (milisegundos, minutos, horas, días). Esto se puede ver a velocidades que permiten una interpretación más fácil.

TECNOLOGÍA:

Los intervalos de tiempo entre capturas de imagen se pueden pre-ajustar en la cámara o a través de un programa de microscopia integrado. La obtención de imágenes de eventos muy rápidos demanda una cámara de alta resolución temporal para capturar detalle (captura promedios de 100cps o más) y alta sensibilidad para capturar suficiente señal dentro de un periodo de tiempo corto. Los detectores enfriados CCD limitan el ruido de fondo así las señales débiles, como las de fluorescencia de bajo nivel, se pueden capturar más fácilmente. Sin embargo, se puede limitar la imagen rápida de alta resolución por las capacidades de adquisición de datos.

La imagen de lapso de tiempo se puede comprometer por pequeños cambios en la configuración del microscopio (fluctuaciones de temperatura/vibraciones) que afectan el foco. En imágenes de células vivas, además, los factores como el ambiente celular en el microscopio, (temperatura, humedad, pH) e iluminación – causando foto-blanqueamiento y foto-toxicidad pueden restringir las imágenes de lapso de tiempo debido al daño celular. La movilidad de la célula y el abultamiento también puede afectar el foco “un problema que se puede manejar tomando varias series de imagen en el plano Z (usando técnicas confocales)”.

APLICACIONES:

La imagen de lapso de tiempo es aplicable a cualquier técnica de microscopia usada para eventos dinámicos. Es ampliamente usada para capturar eventos biológicos en la escala macroscópica y en eventos de dinámica celular en vivo usando técnicas como TIRF, FRAP, FLIP y FRET. También es usada en el ambiente industrial para estudiar materiales, por ejemplo, eventos de cristalización, pruebas de fatiga, erosión.

CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:

La imagen de lapso de tiempo se puede realizar en cualquier sistema de microscopia capaz de acomodar una cámara digital con capacidad de lapso de tiempo. Los parámetros de lapso de tiempo son una característica de varias cámaras digitales diseñadas para microscopia y los sistemas de imagen confocal (el sistema LiveScan Sweptfield no es apropiado para estudios de reflectancia).

SISTEMA RECOMENDADO:

Para imagen de células vivas: Para experimentos sencillos de lapso de tiempo el BioStation IM ofrece el ambiente ideal con incubadora monitoreada/imagen para reducir el molestar a las células y preservar la salud de las células. El BioStation CT, además, ofrece la capacidad de realizar varios experimentos bajo el mismo ambiente de condiciones controladas.

Para imagen de células vivas confocal: el Nikon Ti con su sistema de enfoque perfecto (PFS) con los sistemas confocales LivScan Sweptfield o A1R. El confocal LiveScan Sweptfiled incorporá un detector CCD enfriado de alta resolución, alta sensibilidad, con hasta un 90% de eficiencia cuántica, ideal para imagen de baja luz y eventos intracelulares rápidos. El A1R es un sistema de escaneo híbrido que permite la foto-activación e imagen fluorescente en forma simultánea (sin la necesidad de una unidad láser separada). Un escáner de resonancia, además, captura imágenes a alta velocidad para grabar cambios rápidos después de la foto-activación. El Ti PFS E2000PFS (sistema de enfoque perfecto) corrige continuamente y de forma automática el foco para compensar los cambios infinitesimales en el microscopio durante la adquisición de imágenes en lapso de tiempo. El PFS es compatible con un amplio rango de métodos de observación (por ejemplo, campo claro, fluorescencia, DIC, TIRF, contraste de fases).

LIGAS:

Imagen de lapso de tiempo como modo de imagen confocal: [microscopyu]
Lapso de tiempo con cámaras Digital Sight: [microscopyu]
Nikon Microworld 21: [descarga]