Inmuno-histoquímica | Inmuno-histoquímica
PALABRAS CLAVE: Fluorescencia, fluoróforo, confocal, inmuno-cito-química.
DEFINICIÓN:
La Inmuno-histoquímica explota las interacciones antígeno-anticuerpo para ubicar proteínas específicas en tejidos. El anticuerpo usualmente esta ligado a otra molécula para facilitar su visualización (fluoróforo, enzima reportera, etc.).
TECNOLOGÍA:
En la Inmuno-histoquímica la interacción especificada del antígeno-anticuerpo se usa para identificar selectivamente proteínas específicas en células o secciones de tejidos. Puede realizarse en células rotas o en secciones de tejido congeladas o fijadas. En la tinción directa Inmuno-histoquímica un anticuerpo etiquetado se une directamente a su antígeno. Mientras este solamente usa un anticuerpo y es fácil y rápida para realizarse, la tinción Inmuno-histoquímica directa puede sufrir de falta de sensibilidad. Es más común usar métodos indirectos, donde una segunda capa de anticuerpos marcados se une al anticuerpo primario unido a un antígeno. Varios anticuerpos secundarios pueden unirse a diferentes sitios antigénicos en el anticuerpo primario, por lo tanto amplifican la señal a ser detecta. La reacción antígeno-anticuerpo puede visualizarse usando un reactivo terciario como una enzima reportera (como la peroxidasa que cataliza una reacción formando color), metales coloidales, hapten (antígeno determinante sencillo), radio-etiquetada o fluoróforo (como Texas Red o FITC o especialmente en imagen de tejidos profundos, los puntos cuánticos). En el caso de los sistemas reporteros de enzimas, además de un sustrato apropiado (cromogenéo) como el AEC (3-amino, 9-etíl carbasol), o DAB (diaminobenzadina) resulta en la producción de un producto coloreado que tiñe la célula.
APLICACIONES:
La Inmuno-histoquímica se usa ampliamente en patología y diagnóstico clínico para detectar marcadores de enfermedades, especialmente en cáncer. También se usa ampliamente en aplicaciones de investigación para la localización de proteínas específicas.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
Las secciones de tejidos teñidos con Inmuno-histoquímica son observados con mayor frecuencia usando técnicas de campo claro en microscopios biológicos verticales. Los fluoróforos requieren epí-fluorescencia y se pueden visualizar usando campo amplio o técnicas confocales. La imagen confocal ofrece el mayor alcance para localización espacial de proteínas en especimenes más gruesos
SISTEMA RECOMENDADO:
Las series-I de microscopios Nikon biológicos verticales clínicos y de investigación brindan microscopia de campo claro excepcional ideal para la examinación de secciones de tejidos. Por ejemplo el Eclipse 55i incorpora un sistema de iluminación única con LED blanco ideal para campo claro, mientras que el 90i y 80i incorporan la capacidad de epí-fluorescencia. Para aplicaciones confocales, los usuarios pueden elegir entre el EC1 un instrumento para inicio al sistema de imagen espectral C1si o los sistemas LiveScan Sweptfield para las aplicaciones de investigación más sofisticadas.
LIGAS:
