Imagen Celular Profunda | Imagen Celular Profunda
PALABRAS CLAVE: Imagen en células vivas, fluorescencia, imagen infrarrojo, confocal, inmersión en agua, deconvolución
DEFINICIÓN:
La imagen de célula profunda se refiere a la tecnología que habilita observaciones más profundas en los tejidos, por ejemplo, confocal y microscopia de escaneo láser multifotónicas (2/3 fotones).
TECNOLOGÍA:
La obtención de imágenes de células vivas en tejidos profundos es algo difícil de realizar usan microscopia de luz ya que la luz se dispersa conforme viaja a través del tejido. Se pueden obtener imágenes más profundas con microscopia confocal, donde el uso de un pinhole (orificio muy pequeño) reduce la luz desde planos fuera de foco. Se adquieren secciones ópticas delgadas escaneando a través de un espécimen grueso y pueden ser reconstruidas digitalmente en 3D para habilitar la observación de estructuras profundas/eventos dinámicos. La obtención de imágenes multifotónicas explota la gran transparencia de tejidos a la luz infrarroja (IT). Sin embargo la luz IR, no tiene la energía requerida para excitar fluoróforos a menos que dos o más fotones de luz interactúen con una molécula simultáneamente para alcanzar el doble (o más) de la energía y una reducción proporcional en la longitud de onda. Esto se puede obtener enfocando pulsos ultra-cortos de luz (10-13 segundos o menos) a través del objetivo del microscopio. La excitación solo ocurre cuando dos (o más) fotones interactúan reduciendo el potencial de foto-daño sobre y bajo el plano de foco. La transmitancia IR eficiente a través del lente es un factor clave, y depende del tipo de vidrio usado en la fabricación. Los objetivos de alto desempeño (por ejemplo, alta transmitancia IR, alta A. N, gran distancia de trabajo, inmersión en agua) permiten obtener imágenes de alta resolución con más profundidad en el tejido.
La deconvolución digital se puede usar para mejorar el ruido de fondo y, por lo tanto, mayor resolución profunda en fluorescencia de campo amplio, confocal e imágenes multifotónicas.
APLICACIONES:
La obtención de imágenes profundas es particularmente importante en el estudio de estructuras del cerebro, células nerviosas, el estudio de angiogénesis en cáncer, y trafico molecular, donde la continuidad de la observación en la dirección Z es importante. La imagen de células profundas con microscopia de luz tiene potencial para estudios no invasivos en especimenes vivo, biopsias ópticas y diagnósticos de enfermedades.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
Nikon ofrece varias soluciones para obtener imágenes de tejidos profundos el FN-1 una estación de trabajo para fisiología, soluciones para imagen confocal (sistemas C1 Plus, C1, C1si y LiveScan Sweptfield) y varios objetivos de alta resolución con alta transmitancia en IR ideal para aplicaciones multifotónicas. Los lentes Plan Apocromáticos VC, por ejemplo, no solamente trabajan bien en la parte violeta del espectro, también se desempeñan bien en el IR habilitando mayor penetración en el espécimen y habilitando las aplicaciones multifotónicas. También esta disponible un Plan Apocromático VC de inmersión en agua (VC60x, W. I. A. N. 1.20). Ideal para imágenes profundas de tejidos, este objetivo reduce las aberraciones ópticas causadas por los cambios de fase a través de medios diferentes.
SISTEMA RECOMENDADO:
Consulte a su representante local Nikon para obtener consejo sobre las soluciones de imagen que se adecuen a sus necesidades.
LIGAS:
Laser scanning confocal microscopy: [microscopyu]
Multiphoton imaging: [microscopyu]
Water immersion objectives: [microscopyu]
