GFPS | Proteína Verde Fluorescente
PALABRAS CLAVE: Fluorescencia, fluoróforo, imagen en células vivas, TIRF, FRET, FRAP, FLIP, confocal, GFP-foto-activable, CLEM, AOM
DEFINICIÓN:
El GFP es un fluoróforo natural encontrado en la medusa Aequorea Victoria, la cual fluórese en verde cuando se expone a la luz azul.
TECNOLOGÍA:
El gen para la GPF ha sido aislado y clonado. Este se usa en imagen para identificar y monitorear proteínas en células vivas. Usando tecnologías recombinantes de DNA, el gen par GFP se puede unir a un gen objetivo expresando la proteína de interés. La ubicación y grado de expresión proteínica se puede visualizar en células vivas usando microscopia fluorescente.
Varios colores variantes del gen GFP han sido creados incluyendo el azul (BFP), cian (CFP), y amarillo (YFP) habilitando estudios de pruebas múltiples. Otras variantes incluyen GFPS con emisiones de brillantez incrementada (EGFPS o GPFS mejorados) y GFP foto-activable. El GFP tiene la ventaja de que es estable y relativamente no-tóxico a las células (comparado con algunos fluoróforos sintéticos) y en general no aparenta interferir con la función de las proteínas co-expresadas.
APLICACIONES:
La disponibilidad del GFP y sus derivados han revolucionado la imagen fluorescente en células vivas. Se usa ampliamente para obtener imágenes de proteínas y sus interacciones usando técnicas como TIRF, FREY, FLIP y FRAP. Usado en combinación con confocal e imagen de lapso de tiempo para eventos dinámicos que se pueden monitorear en tiempo con alta resolución temporal y espacial. Se ha usado para visualizar cromosomas, proteínas y sus interacciones, monitoreo de dinámicas de las membranas, tráfico de mRNA, dinámicas del citoesqueleto, desarrollo de embriones, y más…
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
El GFP se puede observar en cualquier microscopio biológico vertical o invertido con capacidad de epí-fluorescencia o en un microscopio estereoscópico con iluminador fluorescente (también conocido como iluminador GFP). Todo el potencial de obtención de imágenes en dinámicas de células vivas usando GFP se realiza en imagen confocal.
SISTEMA RECOMENDADO:
Para una completa flexibilidad con GFP en células vivas, las series de microscopios Ti, TE2000 configurado con fluorescencia de campo amplio y/o sistemas de iluminación TIRF, confocales C1, C1si espectral o LiveScan Sweptfiel ofrecen una amplia variedad de capacidades de imagen. El CLEM se puede usar con el C1 para reducir el foto-blanqueamiento y brinda mayor flexibilidad en estudios de lapso de tiempo. Las series de microscopios Nikon Ti, TE2000 incluyen la tecnología “eliminadora de ruido” para mejorar los cocientes señal entre ruido. Varios objetivos especializados están disponibles (Plan Fluor, Súper Plan Fluor, Plan Apocromático, Plan Apocromático VC).
LIGAS:
Imagen Fluorescente: [microscopyu]
