FLIP | Perdida Fluorescente en Foto-blanqueamiento
PALABRAS CLAVE: Imagen en células vivas, fluorescencia, fluorofóro, FRAP, GFP, AOM
DEFINICIÓN:
En FLIP una región de la célula se blanquea continuamente. Esto es usado para evaluar la dirección del tráfico intracelular observando una perdida progresiva moviéndose del área blanqueada en la dirección del transporte.
TECNOLOGÍA:
La técnica requiere de preparación de células etiquetadas con fluoróforos, usualmente GFP y proteínas relacionadas, dirigidas específicamente a objetivos de interés. El blanqueamiento continuo de un área definida de las células requiere de direccionamiento preciso de la iluminación láser suficiente para inactivar todos los fluoróforos entrando al área. Se puede usar imagen de lapso de tiempo para capturar la perdida de fluorescencia en la dirección del transporte. Los términos FLIP y FLOP se pueden usar también para describir el movimiento entrante (FLIP) y saliente (FLOP) en una región.
APLICACIONES:
Similar al FRAP, el FLIP es una herramienta usada en el entendimiento de las dinámicas de las proteínas en células vivas. Esta se puede usar para evaluar la movilidad del receptor, estudio de eventos señalando y determinar la continuidad de las membranas como el retículo endoplasmático.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
El FLIP se puede llevar a cabo en cualquier microscopio Nikon invertido de grado de investigación usado para imágenes de células vivas o el sistema de microscopia de electrofisiología FN-1. Con frecuencia se realiza en asociación con imagen FRAP y TIRF. El FLIP también se lleva a cabo en sistemas de microscopios confocales (EC1, C1, C1si, Sweptfield) donde el seccionamiento óptico permite monitorear las dinámicas de los fluoróforos en tres dimensiones y sin la interferencia de la luz fuera de foco sobre y bajo el plano de imagen. La tecnología AOM y AOTF (disponible con sistemas confocales C1, C1si, Sweptfield) permiten un control preciso de iluminación láser.
SISTEMA SOLUCIÓN:
El microspio invertido Ti es ideal para cualquier estudio células vivas. Un diseño modular permite configuración con sistemas confocales (C1, C1si, Sweptfield) permitiendo a los usuarios entre modos de imagen de campo amplio y confocal. Los parámetros de Lapso de tiempo se pueden definir usando el software EZ-C1 o NIS-Elements, que también habilita la proyección 3-D, si se requiere. La resolución de la imagen se mejora a través del uso de objetivos especializados Plan Fluor, Súper Fluor y Plan Apocromático VC. Las imágenes se pueden hacer más nítidas usando programas de deconvolución.
LIGAS:
