FCM | Microscopía de Correlación Fluorescente
También conocida como correlación de espectroscopía fluorescente. (FCS)
PALABRAS CLAVE: Fluorescencia, fluoróforo, confocal, imágenes de células vivas, FRET, FLIP, FRAP, imagen de lapso de tiempo
DEFINICIÓN:
Una técnica de fluorescencia confocal para la medición de los coeficientes de difusión y el estudio de las interacciones moleculares.
TECNOLOGÍA:
El FCM detecta fluctuaciones espontáneas temporales de intensidad en emisiones fluorescentes de unos pocos fluoróforos en muestras con muy poco volumen (en el rango de femtolitros) causado por pequeños cambios en ambiente o por la difusión dentro y fuera del espacio de la muestra. El FCM que detecta fotones sencillos, requiere generalmente una avalancha a detectores foto-diodo con los filtros apropiados para monitorear cambios en la intensidad fluorescente, la cual es analizada estadísticamente por algoritmos de auto-correlación. La técnica asociada de fluorescencia de correlación cruzada de espectroscopía requiere de dos detectores (monitoreo de 2-canales). El FCM se puede usar para determinar concentración local, coeficientes de difusión, y promedio constante de reacción intramolecular. Los cambios en los coeficientes de difusión pueden reflejar cambios en tamaño (asociación/separación de otras moléculas), o cambios en la viscosidad de la solución.
APLICACIONES:
El FCM se usa en asociación con la imagen confocal para caracterizar el movimiento e interacción de componentes celulares en solución y puede, por lo tanto, usarse para brindar información en la dinámica molecular e interacciones en células vivas. Se aplica predominantemente al estudio de proteínas, DNA y RNA dentro del fluido intracelular. El FCM puede, en algunos casos, verse comprometido por señal pobre debido a la auto-fluorescencia de fondo, absorción de luz o dispersión y foto-blanqueamiento de pruebas fluorescentes. Sin embargo, la baja concentración de la prueba y el poco poder del láser requerido para FCM es menso estresante a las células que las técnicas alternativas como el FRET, FLIP o FRAP.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
El FCM se puede llevar a cabo e un sistema confocal Nikon junto con el hardware y software apropiado para FCM.
SISTEMA RECOMENDADO:
Por favor consulte a su representante local Nikon para obtener consejos sobre el sistema más apropiado para sus necesidades de imagen.
