Molecular, Faro | Faro Molecular
PALABRAS CLAVE: Fluorescencia, fluoróforo, FRET, extintor (quencher)
DEFINICIÓN:
Los faros moleculares son pruebas con forma de horquilla trenzada oligonucleótidas diseñadas para reportar la presencia de ácidos nucleicos específicos en una solución. Un faro molecular consiste de cuatro componentes, un vástago, una horquilla trenzada, 5’ fluoróforos y 3’ extintores. Cuando el faro con forma de horquilla trenzada no esta unido a su objetivo, el fluoróforo y el extintor se mantienen cercanos y se suprime la fluorescencia. En la presencia de un objetivo nucleótido secuenciado complementario, el vástago del faro se abre para hibridizar al objetivo. Esto separa al fluoróforo y al extintor permitiendo que el fluoróforo florezca. “Los Faros Moleculares que tienen desplazamiento de longitud de onda” incorporan un fluoróforo cosechador adicional habilitando al fluoróforo para emitir con más fuerza.
El modo básico de operación de los faros moleculares ha sido modificado para usarse con células vivas, donde la degradación enzímica del faro puede causar la separación del fluoróforo y del extintor y la generación de una señal errónea. Una solución es un sistema donde dos faros se peguen al mismo objetivo en sitios de unión adyacentes. La Transferencia Resonante de Energía Fluorescente (FRET) entre un faro donador y faro receptor resulta en una señal desplazada hacia rojo que se puede distinguir de señales falso positivas. Los faros basados en células se pueden detectar usando microscopia confocal fluorescente.
APLICACIONES:
Los faros moleculares son usados ampliamente en aplicaciones genómicas y Farma-genómicas (para la detección de poliformismos nucleótidos sencillos (SNPS), monitoreo en tiempo real de PCR, detección de secuencias nucleótidas específicas) y en aplicaciones de diagnóstico basado en células donde se pueden usar, por ejemplo, para detectar células cancerosas o la presencia de microorganismos como las bacterias y los virus.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
La observación de los faros moleculares en células vivas se lleva a cabo usualmente con técnicas de microscopia confocal. La imagen confocal brinda alta resolución y sensibilidad requerida para ubicar con precisión al faro fluorescente y habilita la reconstrucción 3-D para análisis espacial.
SISTEMA RECOMENDADO:
Las series de microscopios invertidos Ti, TE2000 con sistema confocal (EC1, C1+, C1si, o LiveScan Sweptfield)
LIGAS:
