Deconvolución | Deconvolución
PALABRAS CLAVE: Resolución, fluorescencia, confocal, cociente señar a ruido
DEFINICIÓN:
Deconvolución es una técnica que ya sea reste o reasigne fluorescencia borrosa fuera de foco a las imágenes fluorescentes microscópicas para mejorar la claridad de la imagen.
TECNOLOGÍA:
Todas las estructuras etiquetadas fluorescentemente en un espécimen emitirán luz en excitación con luz de la longitud de onda apropiada – ya sea que estén en plano focal o no. La contribución fuera de foco a una imagen puede complicar la imagen y resulta en pérdida de contraste – especialmente cuando usa objetivos con alto poder de resolución, por ejemplo, objetivos de inmersión en aceite de gran A. N.
El proceso de deconvolución busca remover o reasignar lo borroso fuera de foco por medio del procesamiento matemático de los planos (secciones ópticas) a través de una imagen digital.
La deconvolución de las imágenes fluorescentes de campo amplio puede brindar resultados comparables a las imágenes de técnicas confocales. La convolución puede, además, ser usada para mejorar las secciones ópticas adquiridas por un microscopio confocal y es útil en mejorar la claridad al reasignar lo borroso fuera de foco en imágenes 3D construidas desde pilas de secciones ópticas.
Están disponibles comercialmente varios algoritmos para deconvolución 2D o 3D, los cuales pueden ser clasificados como no-restaurativos o restaurativos. El contraste se mejorado quitando lo borroso, mientras que los métodos restaurativos re-asignan la luz a su punto de origen.
APLICACIONES:
La deconvolución se puede aplicar retrospectivamente a cualquier imagen digital fluorescente para mejorar la interpretación. Esta se puede aplicar durante la adquisición de la imagen. Una de las ventajas de la deconvolución es que se puede realizar con muy poca iluminación y por lo tanto habilita la obtención de imágenes de células sensibles a la luz observarse por periodos más largos comparados on la imagen de escaneo láser confocal.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
El software de deconvolución se puede aplicar al procesamiento de cualquier imagen adquirida digitalmente. Nikon usa el software Autoquant como módulo del programa NIS-Elements. El formato de archivo del NIS-Elements puede leer el programa independiente de Autoquant así como el programa de Scientific Volimen Imaging’s Huygens. Ambos paquetes de software son referidos como paquetes avanzados par deconvolución.
SISTEMA RECOMENDADO:
El diseño multipuerto de la serie de microscopios Eclipse Ti permiten el uso de téncias de epí-fluorescencia estándar, imagen de deconvolución de alta resolución o imagen confocal. El programa de deconvolución es un módulo opcional disponible con el programa NIS-Elements.
LIGAS:
Tutorial Confocal con consejos sobre cuando usar las técnicas de deconvolución o multifotónicas.: [microscopyu]
