Contraste | Contraste
PALABRAS CLAVE: Resolución, señal a ruido, fluorescencia, FLIM, campo claro, contraste de fases, DIC, iluminación oblicua, campo oscuro, FLIM, luz polarizada, cubo de filtros, Eliminador de Ruido (Noise Terminator)
DEFINICIÓN:
La diferencia entre el área de interés y el fondo en una imagen definido por las diferencias entre los puntos más brillantez y oscuros en una imagen o por la diferencia en color.
TECNOLOGÍA:
Varios objetos en microscopía tienen inherentemente contrate muy bajo. Las células vivas, por ejemplo, son muy traslucidas y no muy coloreadas haciendo difícil distinguir sus características específicas. Creando contraste en el espécimen permite al observador identificar las estructuras clave. Esto se puede lograr con la manipulación de la iluminación o agregando pruebas dirigidas a características específicas. Los ejemplos de técnicas de iluminación para crear contraste incluyen campo oscuro, contraste de fases, iluminación oblicua, DIC y luz polarizada. Estas toman ventajas de las diferencias en el índice de refracción, relieve, y anisotropía entre diferentes partes del espécimen. Las técnicas de pruebas incluyen el uso de tinciones histológicas dirigidas para crear color contrastante y pruebas fluorescentes para “encender” moléculas clave y estructuras con luz excitada con la longitud de onda apropiada. En imagen fluorescente, los cubos de filtro son usados para (idealmente) permitir que solamente las longitudes de onda de luz seleccionadas lleguen al detector así la luz fluorescente esta contrastada contra un fondo negro. La luz directa puede reducir este contraste y comprometer la imagen especialmente en situaciones donde la emisión fluorescente es débil. Varias pruebas fluorescentes con diferentes espectros de emisión se pueden usar para identificar múltiples estructuras en un espécimen mientras que las emisiones se puedan diferenciar limpiamente. Los espectros que se sobrelapan se pueden resolver ya sea a través de imagen espectral o por el uso de la vida fluorescente como parámetro de contraste
APLICACIONES:
Las técnicas de iluminación son útiles con imágenes de células vivas donde permiten a las características de la célula ser observadas sin la necesidad de tinciones potencialmente tóxicas o fluoróforos. El contraste derivado de la iluminación también es importante en la imagen industrial para habilitar mediciones precisas de las características de la superficie distinguiendo propiedades de materiales cristalinos (microscopia de polarización). Las pruebas de tinciones histológicas dirigidas son usadas predominantemente en especimenes biológicos fijos. Las pruebas de fluoróforos, especialmente las proteínas codificadas genéticamente como las GFP brindan un medio poderoso de generar contraste en células vivas. Se pueden ver varias pruebas simultáneamente en un espécimen para brindar información sobre la relación espacial entre las moléculas de interés (especialmente cuando se usa imagen confocal).
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
Este depende de la técnica y la aplicación usada.
SISTEMA RECOMENDADO:
El diseño modular del sistema de microscopio invertido Ti permite a los usuarios explotar una variedad de técnicas de contraste e imagen en un microscopio como la epí-fluorescencia, DIC, contraste de fases, y Contraste de Modulación Hoffman. Este sistema también integra la tecnología de eliminación de ruido (NOISE TERMINATOR) para mejorar dramáticamente el contraste en las imágenes fluorescentes.
LIGAS:
