CLEM | Microscopia con Exposición de Luz Controlada
PALABRAS CLAVE: Imagen de células vivas, daño por luz, desvanecimiento por luz, foto-toxicidad, imágenes fluorescentes, láseres, confocal, imagen de lapso de tiempo.
DEFINICIÓN:
CLEM es una técnica microscópica diseñada para minimizar la luz requerida para la excitación en microscopia fluorescente sin comprometer la calidad de la imagen.
TECNOLOGÍA:
En CLEM la iluminación de la muestra fluorescente es determinada en bases píxel por píxel (por ejemplo cuando y donde se requiere) por un proceso integrado de retroalimentación en la cámara digital.
La luz de excitación se reduce usando dos estrategias:
La primera esta basada en el principio de que si no hay señal, entonces no se requiere iluminación (por ejemplo, cuando se obtiene imagen del fondo).
La segunda detecta si es que hay suficiente señal para adquirir una imagen. Si es así, la iluminación se detiene.
APLICACIONES:
CLEM es ideal para imágenes de células vivas ya que esta ayuda a reducir el desvanecimiento por luz y la foto-toxicidad – las dos limitantes principales en microscopia con células vivas. Reduciendo los tiempos de recuperación de fluorescencia e incrementando la supervivencia de la célula ofreciendo mayor flexibilidad en el diseño de estudios de lapso de tiempo y otros estudios de imágenes con células vivas.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
CLEM es apropiado tanto para confocal como para técnicas estándar de epí-fluorescencia. El CLEM se puede configurar con los sistemas confocales C1 de Nikon, la serie de microscopios invertidos Ti y TE2000, los microscopios biológicos verticales de la serie Eclipse-i.
CLEM no es apropiado para aplicaciones no fluorescentes.
SISTEMA RECOMENDADO:
Ejemplo. CLEM + Nikon C1 + objetivos de las series Plan Fluor / Super Fluor / VC
LIGAS:
Nota de
Aplicación Microscopía con Exposición de Luz Controlada:
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