CGH | Hibridización Comparativa Genómica

PALABRAS CLAVE: citogenética, fluorescencia, filtros fluorescentes, fluoróforo, FISH, mFISH, microdisección

DEFINICIÓN:

CGH es una técnica citogenética usada para detectar perdidas y ganancias de DNZ a través de especies o en células enfermas (especialmente en células con cáncer) comparada contra células vivas.

TECNOLOGÍA:

CGH es un método analítico basado en FISH y mediciones digitales de cocientes de fluorescencia. Este permite la identificación y mapeo de desbalanceamiento en cromosomas en un espécimen relacionado a otro, por ejemplo, una célula cancerosa comparada con una célula normal. CGH puede realizarse en micro-arreglos y posibilita genomas completos. Dos muestras genómicas DNA son hibridizadas simultáneamente in situ a preparaciones humanas citogenéticas normales en metafase y se detectan con diferentes fluoróforos. El cociente de las intensidades de los dos fluoróforos, detectados con microscopia de fluorescencia empleando los filtros apropiados, es una medición de la copia del número del cociente entre dos muestras de DNA.

TECNOLOGÍA APLICACIONES:

CGH se puede usar para compara DNA desde una amplia variedad de fuentes para detectar desbalanceamiento de DNA. Su mayor aplicación, sin embargo, es en la identificación de ganancias y pérdidas consistentes de DNA responsables de una enfermedad. Se puede usar en diagnóstico prenatal, en diagnóstico y evaluación de tejidos cancerosos, y en la obtención de un mejor entendimiento de diferencias de especies en enfermedades, especialmente en modelos de enfermedad para investigación y descubrimiento de medicamentos. Esta se puede usar con muestras frescas o mezcladas, permitiendo un análisis retrospectivo de muestras archivadas

CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:

CGH se puede realizar en cualquier microscopio Nikon biológico vertical o invertido con epí-fluorescencia (típicamente en un vertical) con los filtros de luz apropiados. CGH requiere óptica de alta resolución, cocientes con alta señal-a-ruido, el cual restringe contraste y límites de detección. Programa de análisis de datos, como Genikon, automatiza el análisis de imagen y facilita reporte de resultados y archivo de datos.

Solución de Sistema:

El Eclipse 90i es ideal para la captura de datos fluorescente de luz baja y permite la captura automatizada de imagen. Están disponibles comercialmente varios programas de análisis de datos para facilitar la interpretación de la imagen.

Más información: www.microscopyu.com/articles/fluorescence/insitu/brennerinsitu