CALI | Desactivación de Cromóforo Asistida por Láser

PALABRAS CLAVE: Fluoróforo, fluorescencia, láseres, AOM, AOTF, imagen de células vivas, inmunofluorescencia, imagen de lapso de tiempo, confocal, foto-toxicidad.

DEFINICIÓN:

Una forma de desactivar proteínas específicas en células vivas (con gran resolución espacial y temporal) usando luz de láser pulsado.

TECNOLOGÍA:

En CALI (también conocido como desactivación de fluoróforo asistida por láser – FALI) se seleccionan proteínas específicas con anticuerpos bloqueadores sin función conjugados con un tinte, como el verde malaquita. El tinte es activado selectivamente enfocando la irradiación láser (por ejemplo, 620nm en el caso de verde malaquita), lo que no afecta significativamente los componentes celulares circundantes. La irradiación del tinte resulta en la generación de radicales de hidróxido altamente reactivo que dañan la proteína de unión al anticuerpo. En micro-CALI, la óptica del microscopio enfoca el rayo láser así solamente un punto de un micro en la célula es foto-activado. Las tecnologías como el AOM y AOTF pueden ayudar a dirigir el poder del láser a áreas de interés definida. CALI puede desactivar proteínas en minutos (dependiendo del poder láser, número de pulsos láser y concentración del tinte) permitiendo a los investigadores estudiar los efectos de las proteínas desactivadas en los procesos celulares. La función de recuperación requiere sintetizar nuevas proteínas – un proceso que puede tomar varias horas.

APLICACIONES:

CALI has sido usado para desactivar, y estudiar la función, de una variedad de proteínas celulares incluyendo enzimas, proteínas de citoesqueleto, receptores, señales de transducción de moléculas, y factores de transcripción. CALI tiene la ventaja de ser una estrategia relativamente fácil de realizar y tiene una gran resolución espacial y temporal. Además, la compensación genética, que puede confundir observaciones en otros métodos, es poco probable que afecte esta técnica en poco tiempo.

CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:

CALI puede llevarse a cabo en epí-fluorescencia de campo amplio y microscopios confocales, aunque el confocal da más oportunidad de mejor resolución fluorescente e imagen 3D.

SISTEMA RECOMENDADO:

Ti con control ambiental configurado con el sistema confocal C1

LIGAS: