TIRF de Luz-Blanca | Reflexión Interna Total Fluorescente con de Luz-Blanca
PALABRAS CLAVE: TIRF, fluorescencia, imagen de lapso de tiempo, campo amplio, GFP, fluoróforo, A. N., inmersión en aceite, SRIC, resolución, cociente señal entre ruido, control ambiental
DEFINICIÓN:
El TIRF de luz blanca es una forma de microscopia TIRF que usa una fuente de luz de mercurio para excitación.
TECNOLOGÍA:
Como en el método TIRF, la luz blanca TIRF explota la reflexión total interna para confinar la excitación de fluoróforos a un plano muy delgado en el contacto entre el espécimen y el cubre objetos o el frasco de cultivo. Al confinar la energía de excitación a esta sección delgada, se obtiene un alto cociente señal entre ruido, haciendo posible la observación de una sola molécula fluorescente.
El uso de una fuente de mercurio para TIRF habilita un fácil cambio entre el TIRF de luz blanca, epí-fluorescencia, SRIC y fluorescencia de capas delgadas (donde el incremento del ángulo de incidencia a un poco más de lo usado en TIRF permite un rango de observación más profundo del área cercana al cubre objetos). Como la iluminación de mercurio tiene un amplio rango de longitud de onda, el cambio de filtros habilita la observación TIRF a una variedad de longitudes de onda.
APLICACIONES:
Como otros modos de TIRF, el TIRF de luz blanca habilita la observación de dinámicas moleculares en células vivas a escala de nanómetros.
CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:
El TIRF de luz blanca se puede configurar en las series de microscopios invertidos Ti y TE2000.
SISTEMA RECOMENDADO:
Las series de microscopios invertidos Ti y TE 2000 (Ti-S, Ti-U, Ti-E, Ti-E Enfoque Perfecto, TE2000-S, TE2000-U, TE2000-E y TE2000-E Enfoque Perfecto) con control ambiental, objetivos Nikon TIRF dedicados el TIRF Apo 60x A. N. 1.49 aceite de inmersión y TIRF Apo 100x 1.49 aceite de inmersión, y la torreta de filtros episcópica de alto desempeño. Los objetivos TIRF Apo corrigen la aberración esférica inducida por los cambios de temperatura. Las fuentes de luz apropiadas incluyen la lámpara de mercurio y el sistema de iluminación de fibra con mercurio de Nikon el Intesilight.
LIGAS:
