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Nikon Confocal A1R-MP, Características Claves

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Microscopio Confocal A1R MP

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  Características Clave

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Escáner Resonante permite hasta 420cps
Imagen profunda con alta sensibilidad y detector no-des-escaneado
Imagen más nítida y brillante con nuevos objetivos de alta A.N.
Separación de alta precisión y alta velocidad
Alineación del haz láser multifotónico con un solo clic

 

 Escáner Resonante que permite captura de hasta 420cps

Imágenes a Ultra Alta Velocidad a 230cps

 

El escáner resonante exclusivo de Nikon es capaz de obtener imágenes de un área amplia a una velocidad mucho mayor que la de los escáneres no resonantes, posibilitando imágenes a 420cps – el más rápido del mundo usando tecnología de escaneo por punto. El NDD*1 para microscopia multifotónica hace posible obtener imágenes profundas en el tejido de una forma rápida. El sistema de reloj óptico de Nikon permite una iluminación uniforme – aun en alta velocidad.

 

*1 NDD (Detector No Des-escaneado) a diferencia de la imagen confocal, donde la luz emitida por el espécimen pasando a través de un pinhole y des-escaneada antes de ser detectada, el A1R MP elimina la necesidad de un pinhole. Ubicando al NDD cercano a la apertura posterior del objetivo, se pueden colectar más emisiones fluorescentes dispersas, mejorando la sensibilidad del instrumento.

Microcirculacion intravitral A1R MP

 

Visualización de microcirculación intravitral

Fueron excitadas células en vasos sanguíneos dentro de un organismo vivo durante un femtosegundo con láser IR pulsado con el escáner resonante del A1R MP de ultra alta velocidad, y sus movimientos fueron capturados sucesivamente en fluorescencia a 30cps (30mseg.) con tres canales de color separados.

La punta de flecha índica el rastreo del movimiento del núcleo de un glóbulo blanco

Se excitan y obtienen imágenes de tres pruebas fluorescentes al mismo tiempo – núcleos (azul), endotelio (verde) y plasma (rojo). El láser ultrarrápido de larga longitud de onda en combinación con el escáner resonante de ultrarrápida velocidad reducen efectivamente el foto-daño y posibilita obtener imágenes de biomoléculas multifotónica.

Resolución de imagen: 512 x 512 píxeles, velocidad de captura: 30cps, Objetivo: inmersión en agua 60x.

 

Fotografiado con la cooperación del Dr. Satoshi Nashimura, Departamento de Medicina Cardiovascular, La Universidad de Tokio, TSBMI, PRESTO, Agencia de Ciencia y Tecnología Japonesa.

 Imagen Profunda con Detector des-escaneado de alta sensibilidad

El nuevo 4 canal desarrollado por Nikon para la microscopia multifotónica NDD permite obtener imágenes profundas dentro del espécimen. Un detector* con muy alta sensibilidad y un área más amplia que la de los modelos convencionales se coloca cerca de la apertura posterior del objetivo donde la formación de la imagen del espécimen se lleva a cabo. Esta configuración mejora la eficiencia de detección para fluorescencia dispersa, y permite la captura de señales profundas en organismos vivos de una forma más clara y confiable, con mayor coeficiente S/R y menos aberraciones.

 

*La detección de tanta fluorescencia dispersa como sea posible, es importante para la observación de partes profundas en el espécimen. La profundidad de detección varía dependiendo de la sensibilidad del detector, tamaño y ubicación de su instalación.

 

Imagenes multifotonicas

Figura 1 (izquierda)

Imagen de áreas profundas de columna vertebral primordial (tubo neural) de un embrión de rata de 13.5 días. Todo el embrión fue cultivado aproximadamente por 24 horas después de la transfección con proteína verde fluorescente (GFP) por electroporación. Una sección cruzada fija se sumergió en gel y se utilizó excitación de dos fotones utilizando un rayo láser pulsado IR. La observación de las áreas profundas de más de 600um fue obtenida.

Fotografiado con la cooperación de: Dr. Noriko Osumim Dr. Massanor Takahasi. División de Desarrollo de Neurociencias, Universidad Tohoku, Escuela de Graduados de Medicina

 

Figura 2 (Derecha)

Imagen de células neuronales de cerebro de rata expresando eGFP capturada usando detectores no-des-escaneados (NDD)

Excitada con láser IR pulsado (920nm), que permitió imagen con mayor coeficiente S/R de áreas de tejido cerebral profundo de más de 600um en el eje Z. Se uso un nuevo objetivo CFI Apo LWD 40x WI lS.

Fotografiado con la cooperación de: Dr. Satoru Kondo, Departamento de Neurobiología Celular, Escuela de Graduados de Medicina, Universidad de Tokio

 Imagen más nítida y brillante usando nuevos objetivos de Gran A. N.

Objetivos para multifotonicoLos nuevos objetivos de inmersión en agua ofrecen una corrección superior de la aberración cromática a través de un amplio rango de longitud de onda y ofrecen una alta transmisión que cubre desde el cercan al ultravioleta a cercano al infrarrojo, estos es posible gracias al recubrimiento propietario de Nikon con Nano Cristales*. El CFI Plan Apo IR 60x WI con una apertura numérica de 1.27 – el objetivo de inmersión en agua más alto en el mundo – ofrece imágenes de alto contraste con brillantes y resoluciones excelentes.

*Una película con un índice de refracción ultra-bajo que fue inicialmente desarrollado para los steppers IC de Nikon. Con su robusta estructura – las nanopartículas se arreglan en una composición esponjosa – por lo tanto el Recubrimiento de Nano Cristales mejora la transmisión de la luz en un amplio espectro de la longitud de onda.

 

Objetivos Nikon para Microscopia Multifotónica

CFI Apo LWD 40x WI lS A. N. 1.15, D. T. 0.59 – 0.61mm N
CFI Apo 40x WI lS A. N. 1.25, D. T. 0.20 – 0.16mm N
CFI Plan Apo IR 60x WI A. N. 1.27, D. T. 0.18 – 0.16mm N
CFI Plan Fluor 20x A MI A. N. 0.75, D. T. 0.35mm

N Recubrimiento de Nano Cristales Depositado

 
Imagenes con nano cristales en los objetivos

 

Sección cruzada fija vertebra primordial (tubo neural) transfección con GFP de un embrión de rata de 13.5 días. Todo el embrión fue cultivado aproximadamente por 24 horas. Células neuro-epiteliales y axón conmisural de migración interna claramente observadas

 

Fotografiado con la cooperación de: Dr. Noriko Osumim Dr. Massanor Takahasi. División de Desarrollo de Neurociencias, Universidad Tohoku, Escuela de Graduados de Medicina

 

Imagen de células neuronales de cerebro de rata fijadas expresando eGFP. Excitada con láser IR pulsado (920nm), que permitió imagen con mayor coeficiente S/R de áreas de tejido cerebral más profundo que con las de un microscopio confocal tradicional

 

Fotografiado con la cooperación de: Dr. Satoru Kondo, Departamento de Neurobiología Celular, Escuela de Graduados de Medicina, Universidad de Tokio

 

 Separación espectral de alta velocidad y alta precisión

Además de la detección espectral y su separación por el detector de 32 canales, la separación de mezclas por el 4 canal NDD para la microscopia multifotónica también se realiza. Las imágenes capturadas con el escáner resonante pueden ser separadas, así se pueden capturar imágenes de alto contras y áreas profundas dentro del espécimen a ultra alta velocidad

Separacion espectral

Excitación triple con láser de longitud de onda de 750nm (izquierda), Alexa 488 MitoTracker Rojo, DAPI (derecha)

 

Imagen de espécimen teñida con Alexa 488, MitoTracker Rojo y DAPI, fue capturada con detector espectral durante excitación por dos-fotones y separada. Excitación con longitud de onda infrarroja que reduce el daño a las células vivas

 Alineación de haz láser con un solo clic

Cuando la longitud de onda láser multifotónica o un grupo de pre-compensación de velocidad cambia, la posición del haz láser multifotónico se puede desviar, lo que resulta en imágenes de intensidad variable, o una ligera desalineación de las imágenes fluorescentes que son producidas por la luz láser visible y el láser multifotónico.

 

Ya que el láser multifotónico es invisible al ojo, es difícil alinearlo y potencialmente peligroso para el usuario, especialmente en longitudes de onda mayores a los 800nm. El nuevo sistema desarrollado por Nikon con alineación automática para el A1R MP corrige la falta de alineación del láser con un solo clic.

 

Alineacion

 

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